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幾項(xiàng)常用細(xì)胞固定劑及其優(yōu)缺點(diǎn)比較發(fā)表時(shí)間:2019-09-11 14:55 常用細(xì)胞固定劑及其優(yōu)缺點(diǎn)比較 1、95%酒精:最常用的細(xì)胞學(xué)固定液,能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,但核蛋沉淀后,能溶于水,因此,經(jīng)95%酒精固定的涂片,染色前沒(méi)有必要經(jīng)過(guò)水洗。此固定液適用于蘇木素-伊紅染色和巴氏染色。固定時(shí)間根據(jù)標(biāo)本的不同,時(shí)間也不盡相同,一般標(biāo)本固定時(shí)間為15-30分鐘,痰標(biāo)本需要更長(zhǎng)一些時(shí)間。經(jīng)過(guò)95%酒精固定的標(biāo)本,細(xì)胞核保存較好,結(jié)構(gòu)清晰,顏色鮮艷。如果在95%酒jing液內(nèi)加入聚乙二醇更佳,可以保護(hù)細(xì)胞免受空氣干燥后的人工假象。 2、乙mi酒jing液(1:1):其效果與95%酒精相似,但由于乙mi有很強(qiáng)的吸水性和特有的刺激性氣味,容易揮發(fā),長(zhǎng)期低濃度吸入,有頭痛、頭暈、疲倦、嗜睡、蛋白尿、紅細(xì)胞增多等不良反應(yīng)。長(zhǎng)期皮膚接觸,可發(fā)生皮膚干燥、皸裂。所以現(xiàn)在已經(jīng)逐漸被95%酒精所代替。 3、冰醋酸:5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白,但能沉淀核蛋白。滲透性強(qiáng),固定快,能使紅細(xì)胞膨脹而破碎,常與其它液體配合使用。 4、甲醇:固定時(shí)間快,細(xì)胞收縮小,細(xì)胞核保存較好,結(jié)構(gòu)清晰,染色鮮艷。常作為穿刺細(xì)胞涂片的固定液。對(duì)抗原保存較好,可作為細(xì)胞涂片免疫組化的固定液。缺點(diǎn)是具有揮發(fā)性和毒性,大量接觸與吸入對(duì)中樞神經(jīng)有一定的傷害。甲醇的毒性與其代謝產(chǎn)物甲醛和甲酸的蓄積有關(guān)。以前認(rèn)為毒性作用主要為甲醛所致,?甲醛能抑制視網(wǎng)膜的氧化磷酸化過(guò)程, 使膜內(nèi)不能合成ATP,細(xì)胞發(fā)生變性,最后引起視神經(jīng)wei縮。近年研究表明,甲醛很快代謝成甲酸,急性中毒引起的代謝性酸中毒和眼部損害,主要與甲酸含量相關(guān)。 5、無(wú)水酒精:?對(duì)糖原保存較好,容易使細(xì)胞收縮,其性能與95%酒精相似,很少單獨(dú)使用,一般只用于糖原的固定。 6、丙酮:為易揮發(fā)的無(wú)色液體,有刺激性氣體。可使蛋白質(zhì)沉淀,滲透性強(qiáng),細(xì)胞收縮嚴(yán)重,對(duì)核的固定差。很少用于常規(guī)細(xì)胞學(xué)的固定。廣泛用于酶組織化學(xué)中的各種酶的固定,也有人用于抗原的保存,作為細(xì)胞涂片免疫組化的固定液。丙酮具有揮發(fā)性和毒性,大量接觸與吸入對(duì)肝、腎及中樞神經(jīng)有一定的傷害。 7、10%中性緩沖甲醛液: 配方1:40%甲醛10ml,0.01mol/L?pH7.4的PBS90ml。 配方2:40%甲醛120ml,蒸餾水880ml,磷酸二氫鈉(NaH2PO4;H2O)4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)13g。 8、Carnoy?固定液:配方:無(wú)水乙醇60ml,氯f(wàn)ang30ml,冰醋酸10ml Carnoy液能固定胞漿和胞核,尤其適宜于染色體等。常用于糖原及尼氏體的固定,由于冰醋酸能溶解紅細(xì)胞并可防止細(xì)胞由酒精引起的過(guò)渡收縮,對(duì)固定有血的標(biāo)本和顯示DNA、RNA效果很好。缺點(diǎn)是每次固定后固定液內(nèi)有大量的紅細(xì)胞碎片和細(xì)胞脫落,必須及時(shí)過(guò), 否則容易造成污染。其次,氯f(wàn)ang具有揮發(fā)性和毒性,大量接觸與吸入對(duì)肝、腎及中樞神經(jīng)有一定的傷害。 10%中性緩沖甲醛液對(duì)大多數(shù)抗原保存較好,是免疫組織化學(xué)最常用的固定液,組織穿透好,組織收縮較小。但此液體不適合固定濕固定的涂片,可作為干固定涂片和細(xì)胞蠟塊的定液。甲醛也具有揮發(fā)性和毒性。大量吸入會(huì)出現(xiàn)呼吸道的嚴(yán)重刺激和水腫、眼刺痛、頭痛,也可發(fā)生支氣管哮喘。經(jīng)常吸入少量甲醛,能引起慢性中毒, 出現(xiàn)粘膜充血、皮膚刺激癥、過(guò)敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等。全身癥狀有頭痛、乏力、胃納差、心悸、失眠、體重減輕以及植物神經(jīng)紊亂等。 |
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