在繼續(xù)大鼠雌二醇受體(ER) ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒的操作步驟時(shí)，我們需格外注意每一步的精確執(zhí)行，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
首先，完成樣品準(zhǔn)備階段后，進(jìn)入關(guān)鍵的加樣步驟。使用移液器小心地將處理好的樣品及不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別加入相應(yīng)的微孔中，注意避免氣泡產(chǎn)生，以免影響后續(xù)反應(yīng)。每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品至少設(shè)置兩個(gè)復(fù)孔，以提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可信度。
接下來(lái)，是加酶標(biāo)試劑的步驟。按照試劑盒說(shuō)明書指示的量，向每個(gè)微孔中加入適量的酶標(biāo)試劑，輕輕晃動(dòng)或輕敲板框，使試劑充分混勻。此步驟是形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物的重要過(guò)程，需確保酶標(biāo)試劑均勻分布于每個(gè)微孔中。
隨后，進(jìn)行溫育。將加好試劑的酶標(biāo)板用封板膜封好，放入預(yù)設(shè)好溫度的恒溫箱中，按照說(shuō)明書規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行溫育。溫育期間，避免酶標(biāo)板受到劇烈震動(dòng)，以免影響反應(yīng)效果。
溫育結(jié)束后，取出酶標(biāo)板，進(jìn)行洗滌。小心揭去封板膜，棄去孔內(nèi)液體，然后向每孔加入適量的洗滌液，靜置一段時(shí)間后甩去洗滌液，如此重復(fù)洗滌多次，以徹底去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性干擾。
至此，我們已完成了ELISA檢測(cè)的前半部分關(guān)鍵步驟。接下來(lái)，將進(jìn)行顯色反應(yīng)和終止反應(yīng)，并通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光度值，最終根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中雌二醇受體的含量。每一步操作都需細(xì)致入微，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤。
