無菌單料乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基的配制

無菌單料乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基的配制：

1）、Camp-BAP固體培養(yǎng)基的配制：

稱取8.92g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。

2）、Skirrow固體培養(yǎng)基的配制：

稱取8.5g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。

FBP原液配置：

分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵，溶于20ml蒸餾水中，濾膜過濾除菌，放置4°C冰箱可保存一周。

3）、布氏肉湯增菌液的配制：

稱取28.1g布氏肉湯粉末，溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌，冷卻后備用。

2、增菌培養(yǎng)

寬鱗大孔菌將新鮮食品，如雞肉，減碎，取5g置于50ml離心管中，加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品，擰緊離心管，先在37°C下預(yù)增菌4小時(shí)，在加入100 ul頭孢哌酮（30mg/ml），并顛倒混勻，放置在微需氧培養(yǎng)箱中42°C培養(yǎng)48小時(shí)。

3、分離純化

用接種環(huán)沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上，在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發(fā)亮的菌落在Camp-BAP平板上純化，挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。

4、菌株培養(yǎng)

將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)。微需氧條件的創(chuàng)造可用微需氧產(chǎn)氣袋和密閉培養(yǎng)罐，也可以用微需氧培養(yǎng)箱（三氣培養(yǎng)箱）培養(yǎng)。

5、菌株保存方法

挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養(yǎng)基上平板劃線，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)，用滅菌棉簽從平板上刮下長(zhǎng)出的菌落，懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中，置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差，存放一周后細(xì)菌復(fù)蘇率即顯著下降。此外，保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。