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剛果錐蟲PCR試劑盒擴增產(chǎn)物在電泳分析發(fā)表時間:2020-04-16 16:11 剛果錐蟲PCR試劑盒擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 1)最常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系 3) 與反應(yīng)起始時RNA的總量及純度有關(guān) 4) 建議在試驗中加入對照RNA 5) **鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴增時,在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10 6) 建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于**鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。 7) 目的mRNA中含有強的轉(zhuǎn)錄中止位點,可以試用以下方法解決: a. 將**鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。 b. 使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行**鏈反應(yīng)。 |
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