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人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理發(fā)表時間:2020-03-10 11:44 PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理: 您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導(dǎo)致對細(xì)胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。 1.收到細(xì)胞,*時間要鏡檢:觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度,有疑議及時咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細(xì)胞聚集在一起,但是細(xì)胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。 2.當(dāng)通過上一步的觀察,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時,進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下,會調(diào)整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。 3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細(xì)胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細(xì)胞類型,一次少傳些,保證每瓶細(xì)胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞,*次處理也可以依照第二種情況。 |
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